高速逆流色譜儀是一種新的液相色譜技術(shù)，利用液液兩相的逆流分配，在沒有固體填料、不需使用固態(tài)固定相的情況下，而是利用離心力產(chǎn)生的恒定力將固定相保留在由管道連接的一系列的腔體中，實(shí)現(xiàn)復(fù)雜化學(xué)物質(zhì)的混合物分離。它以液體溶劑為固定相，螺旋柱在行星運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的離心力，使互不相溶的兩相不斷互相混合，同時(shí)保留其中的一相，使用恒流泵連續(xù)輸入另一相，樣品溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配，按分配系數(shù)的次序，被依次洗脫出來，它替代了傳統(tǒng)制備型高效液相色譜的填充柱。當(dāng)你計(jì)劃購買一臺(tái)高速逆流色譜儀的時(shí)候，哪些指標(biāo)是衡量其性能的關(guān)鍵指標(biāo)呢？
1. 固定相保留率
由于高速逆流色譜儀的固定相是液體，在分離過程中如何將液體固定相一直保留在里面，是所有生產(chǎn)廠家和使用者最關(guān)心的問題，它是由儀器的本身性能決定的，它與公轉(zhuǎn)半徑、自轉(zhuǎn)半徑、旋轉(zhuǎn)速度等因素有關(guān)，也與流動(dòng)相的流速有關(guān)聯(lián)，與溶劑體系關(guān)系不大；最好設(shè)備的固定相保留率可以達(dá)到90%；一般設(shè)備的固定相保留率為50%。
如柱體積為200ml，流動(dòng)相流速為2ml/min，固定相保留率為90%，表示流動(dòng)相和全部180ml固定相交換一次的時(shí)間是10分鐘；如固定相保留率為50%，表示流動(dòng)相和全部100ml固定相交換一次的時(shí)間需要50分鐘；線圈中180ml固定相和100ml固定相的理論塔板數(shù)也是相差比較大的；從中可以看到二者的分離效率和分離效果相差很大。
如果設(shè)備的固定相保留率較低，則對(duì)兩相溶劑體系的選擇和配比要求就高，使用者就需要不斷調(diào)整溶劑配比，進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)摸索，找到最佳的配方，以提高樣品的分離度，才能將樣品中的多個(gè)成分分離出來；如果設(shè)備的固定相保留率很高，對(duì)兩相溶劑體系的選擇和配比要求就十分寬松，稍微調(diào)整就能將樣品中的多個(gè)成分分離出來，更為重要的是有些樣品只有在高的固定相保留率下才能分開，固定相保留率低就無能為力了。各個(gè)生產(chǎn)廠家的設(shè)備指標(biāo)都不標(biāo)注固定相保留率是多少，但都可以提供以前的分析測(cè)試報(bào)告或者出廠的測(cè)試報(bào)告供用戶參考的。
2. 線圈的數(shù)量和柱體積
以前受到技術(shù)的限制，一臺(tái)儀器只能放置一個(gè)線圈，且把線圈分成多個(gè)部分繞制在幾個(gè)自轉(zhuǎn)軸上面，為了保持動(dòng)態(tài)平衡，公轉(zhuǎn)半徑、自轉(zhuǎn)半徑都很小，固定相保留率也只能達(dá)到50%左右；最近幾年動(dòng)態(tài)平衡技術(shù)大幅提高，首先實(shí)現(xiàn)了每個(gè)線圈可以獨(dú)立繞制就能平衡，其次完成了多個(gè)線圈混合繞制，最終實(shí)現(xiàn)了一臺(tái)儀器上可以放置多個(gè)線圈的夢(mèng)想，經(jīng)常配置兩個(gè)線圈或四個(gè)線圈。
柱體積是由線圈的直徑和長(zhǎng)度決定的，其大小影響到上樣量的多少，合理的配置柱體積可以覆蓋大部分樣品的制備，一般習(xí)慣配置一個(gè)25ml的分析線圈，用于樣品成分的簡(jiǎn)單分析和前期實(shí)驗(yàn)的摸索；同時(shí)配置一個(gè)100ml的制備線圈，一次最大上樣量可以達(dá)到2克；如果條件允許，配置4個(gè)不同柱體積的線圈，使用起來將更方便，能實(shí)現(xiàn)線圈之間的串并聯(lián)，從而提高樣品的分離效果和分離能力。
3. 線圈的材質(zhì)
高速逆流色譜儀的線圈材質(zhì)一般使用PTFE材料，它耐酸耐堿，同時(shí)適合所有的有機(jī)溶劑，材質(zhì)價(jià)格也便宜，重量較輕，很容易實(shí)現(xiàn)動(dòng)態(tài)平衡，但唯一缺點(diǎn)是耐壓較低，在高速旋轉(zhuǎn)的情況下，工作壓力超過10bar或者線圈出口堵塞，PTFE線圈就有可能爆裂，產(chǎn)生溶劑泄漏；一旦發(fā)生內(nèi)部線圈爆裂，對(duì)設(shè)備將是毀滅性的，修復(fù)的成本是十分昂貴的；采用316不銹鋼制作線圈，是近幾年動(dòng)態(tài)平衡技術(shù)大幅提高以后才出現(xiàn)的，徹底解決了高速逆流色譜儀耐壓低的缺陷，工作壓力可以承受1000bar，由于316不銹鋼材質(zhì)較重，成本高，線圈繞制難度大，動(dòng)態(tài)平衡技術(shù)要求高，從而導(dǎo)致儀器整體價(jià)格偏高；鈦合金是近幾年出現(xiàn)的一種新型材料，它克服了316不銹鋼材質(zhì)較重的缺點(diǎn)，對(duì)動(dòng)態(tài)平衡技術(shù)要求不高，但鈦合金材質(zhì)的價(jià)格比316不銹鋼要貴出很多，是三種材質(zhì)中的儀器價(jià)格最貴的。
此外設(shè)備的各個(gè)安全保護(hù)功能，進(jìn)樣六通閥，以及不同體積的樣品定量環(huán)是高速逆流色譜儀必須配置的，方便今后使用。
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