點(diǎn)擊圖片查看原圖
淺談液相色譜儀應(yīng)用方案的建立方法
液相色譜儀檢測(cè)的靈敏性較高，被廣泛運(yùn)用于食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域，其主要檢測(cè)項(xiàng)目是食品和藥物工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中的藥品殘留，減少對(duì)人體的傷害。相關(guān)檢測(cè)、科研部門(mén)在建立藥品中特定物質(zhì)檢測(cè)或含量測(cè)定的應(yīng)用方案時(shí)，須按照藥典收載的相關(guān)藥品分析方法的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。建立完整的液相色譜儀檢測(cè)方案需涵蓋檢測(cè)儀器、檢測(cè)試劑、樣品的制備、液相色譜儀檢測(cè)條件、檢測(cè)結(jié)果以及結(jié)果分析方法。在建立方法時(shí)，選擇儀器配置以及試劑應(yīng)當(dāng)注意以下事項(xiàng)：①液相色譜柱填料首選十八烷基鍵合硅膠；②檢測(cè)器首選UV檢測(cè)器；流動(dòng)相首選甲醇-水系統(tǒng)，應(yīng)盡可能少用含有緩沖液的流動(dòng)相，如為堿性藥物，流動(dòng)相的pH值應(yīng)為7~8；如為酸性藥物，流動(dòng)相的pH值應(yīng)為3~4；④內(nèi)標(biāo)物應(yīng)首選易得到的純度較高的化學(xué)試劑或?qū)φ掌罚瑧?yīng)與待測(cè)物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)相似，理化性質(zhì)接近，峰的響應(yīng)值相當(dāng)，以及分離度應(yīng)大于1.5。
待檢測(cè)樣品溶液的配置可直接由樣品原料經(jīng)攪碎、溶解、過(guò)濾、提取而來(lái)，提取出來(lái)的樣品溶劑必須經(jīng)過(guò)氮吹儀結(jié)晶提純處理后，再經(jīng)溶劑過(guò)濾器過(guò)濾方可進(jìn)入儀器進(jìn)行檢測(cè)分析。
檢測(cè)過(guò)程中，須按照色譜檢測(cè)條件操作，且要精準(zhǔn)控制液相色譜儀各部件的試驗(yàn)狀況，包括進(jìn)樣器、泵的壓力調(diào)整，流動(dòng)相的流速控制，色譜柱溫箱、檢測(cè)器、進(jìn)樣口的溫度控制等都須嚴(yán)格執(zhí)行。任何檢測(cè)條件的異動(dòng)都會(huì)影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
檢測(cè)結(jié)果的分析，即對(duì)檢測(cè)樣品的定性定量分析，需注意以下事項(xiàng)：若雜質(zhì)峰的響應(yīng)值與主成分峰的響應(yīng)值相差太大，應(yīng)首選自身對(duì)照法，而不宜選用面積歸一化法；若以?xún)?nèi)標(biāo)法測(cè)定含量，應(yīng)考慮內(nèi)標(biāo)物是否含有干擾供試品的雜質(zhì)；如以外標(biāo)法測(cè)定含量，對(duì)照品與供試品應(yīng)各取樣2份，對(duì)照溶液各進(jìn)樣3次，供試品溶液各進(jìn)樣2次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD應(yīng)不得大于l.5％）。
最后，應(yīng)進(jìn)行最低檢出量試驗(yàn)，并對(duì)同一樣品分析結(jié)果的重現(xiàn)程度、方法的可行性，并作出評(píng)價(jià)。